产品介绍
Monomix IEX离子交换层析介质专为生物样品的分离纯化而设计。其以亲水性聚甲基丙烯酸酯为基质,粒径有15、30 & 60 μm三种规格,粒径分布更均一。其中Monomix MC填料孔径500 Å,为中等载量离子填料。Monomix HC孔径1000 Å,为高载量离子填料,动态载量大于80mg/ml。
Monomix IEX层析介质具有良好的物理化学稳定性,介质表面经赛分科技特殊处理,具有更好的亲水性,最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。并通过专有的表面修饰技术,在亲水性基质表面键合不同的离子交换官能团得到强阳离子交换(SP)、强阴离子交换(Q)、弱阴离子交换(DEAE)三种层析介质,并确保了表面离子交换层的高密度和均一性。Monomix IEX层析介质可广泛适用于抗体、疫苗、胰岛素、蛋白、核酸、肝素等生物样品的分离和纯化。
介质表面化学组成
图1. Monomix HC/MC-SP、Q和DEAE介质的表面化学组成示意图
图2. Monomix MC30(粒径30μm)的电镜扫描图像。高度均一分散的介质具有很窄的颗粒分布(D90/D10<1.3)
图3. Monomix HC30(粒径30μm)的电镜扫描图像。
介质技术参数
表1. Monomix HC-IEX技术参数
填料类型
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Monomix HC-Q
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Monomix HC-DEAE
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Monomix HC-SP
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基质
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亲水性聚甲基丙烯酸酯
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官能团
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-N+(CH3)3
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-N(C2H5)2
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-SO3H
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粒径大小(μm)
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15
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30
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60
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15
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30
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60
|
15
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30
|
60
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孔径大小 (Å)
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1000
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1000
|
1000
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动态载量*(/mL填料)
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≥ 95mg BSA
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≥ 90mg BSA
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≥ 80mg BSA
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≥ 95mg BSA
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≥ 90mg BSA
|
≥ 80mg BSA
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≥ 110mg Lysozyme
|
≥ 90mg Lysozyme
|
≥ 90mg Lysozyme
|
最大线性流速
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1000 cm/h
|
操作温度
|
≤40℃
|
pH适用范围
|
2-12
|
操作压力
|
≤1 Mpa(10 bar)
|
流动相兼容性
|
适用于缓冲盐体系(Tris、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等),常规有机相/水体系(乙腈、乙醇等)
|
长期保存方法
|
70% (v/v) ,保存于20%乙醇中
|
再生
|
1-2 M NaCl
|
清洗
|
0.5 M HCl or 0.5-1.0 M NaOH ,强疏水性结合的杂质可用0.1-1%的吐温或Triton X-100清洗
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表2. Monomix MC-IEX技术参数
填料类型
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Monomix MC-Q
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Monomix MC-DEAE
|
Monomix MC-SP
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基质
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亲水性聚甲基丙烯酸酯
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官能团
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-N+(CH3)3
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-N(C2H5)2
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-SO3H
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粒径大小(μm)
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15
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30
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60
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15
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30
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60
|
15
|
30
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60
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孔径大小 (Å)
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500
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500
|
500
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动态载量*(/mL填料)
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≥ 50mg BSA
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≥ 40mg BSA
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≥ 30mg BSA
|
≥ 50mg BSA
|
≥ 40mg BSA
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≥ 30mg BSA
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≥ 60mg Lysozyme
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≥ 40mg Lysozyme
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≥ 30mg Lysozyme
|
最大线性流速
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1000 cm/h
|
操作温度
|
≤40℃
|
pH适用范围
|
2-12
|
操作压力
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≤1 Mpa(10 bar)
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流动相兼容性
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适用于缓冲盐体系(Tris、磷酸盐、醋酸盐缓冲液等),常规有机相/水体系(乙腈、乙醇等)
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长期保存方法
|
70% (v/v) ,保存于20%乙醇中
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再生
|
1-2 M NaCl
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清洗
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0.5 M HCl或0.5-1.0 M NaOH ,强疏水性结合的杂质可用0.1-1%的吐温或Triton X-100清洗
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*动态载量(Dynamic Binding Capacity)测试方法:
Monomix HC/MC-Q:线性流速为180 cm/h,上样液为含2 mg/mL牛血清蛋白的50 mM Tris缓冲液(pH=8.5)。
Monomix HC/MC-DEAE:线性流速为180 cm/h,上样液为含2 mg/mL牛血清蛋白的20 mM Tris缓冲液(pH=8.0)。
Monomix HC/MC-SP:线性流速为360 cm/h,上样液为含1mg/mL溶菌酶的50 mM磷酸盐缓冲液(pH=6.0)。
介质特性
& 高结合载量和极好的生物相容性
& 刚性基质可耐受高压和高流速
& 高分辨率、高柱效和高回收率
& 高批间重现性
& 易于放大
& 高度亲水性表面,可忽略的非特异性吸附
& 常规装柱条件下,体积变化小
& 产品供应能力: 〉100 L
高动态载量
Monomix IEX层析介质以聚甲基丙烯酸酯微球为基质,在低驻留时间条件下仍然具有很高的动态结合载量。在实际使用过程中, 在同样的柱子尺寸和填料体积下,Monomix IEX可以缩减生物样品生产下游纯化的时间,提高生产效率;在同样的下游纯化的时间内,Monomix IEX可以装更长的柱子(填料体积大),可以批次处理更多的生物样品,从而提高生产效率。
图4. Monomix HC30/60-Q、DEAE和SP离子交换层析介质动态载量和驻留时间关系
a)HC30/60-Q
填料: Monomix HC-Q (30&60μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: 含2 mg/mL牛血清蛋白的50 mM Tris缓冲液(pH8.5)
流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)
检测器:280 nm 检测温度:室温
b)HC30/60-DEAE
填料: Monomix HC-DEAE (30&60μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: 含2 mg/mL牛血清蛋白的20 mM Tris缓冲液(pH8.0)
流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)
检测器:280 nm 检测温度:室温
c)HC30/60-SP
填料: Monomix HC30-SP & Monomix HC60-SP (30&60μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: 含1 mg/mL溶菌酶的50 mM 磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)
检测器:280 nm 检测温度:室温
更快的操作流速
相比于传统的琼脂糖基质,采用聚甲基丙烯酸酯基质可以提高填料的耐压性能,能够在更快的流速下实现样品纯化,(或者可以装更长的柱子,可以批次处理更多的生物样品)节省宝贵的时间,提高生产效率。对于不稳定的生物样品(要求快速分离纯化母液),在提高生产效率的同时可以同时提高产品的收率和质量控制。
图5. Monomix IEX填料背压与流速的线性关系。由于表面结构的不同,在相同流速下,MC介质能显示出更低的背压
柱尺寸: 10 mm ID × 150 mm (不锈钢)
流动相:Monomix HC/MC-Q:50 mM Tris缓冲液(pH 8.0)
Monomix HC/MC-SP:20 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)
超高的耐碱性能
Monomix IEX 层析介质可在pH2-12之间正常使用,对在线清洗的1.0 M NaOH也显示出良好的耐碱性。如图6所示,以1200个柱体积的1.0 M NaOH进行在线清洗,溶菌酶(Lysozyme)保留时间的变化可以忽略不计。
图6. Monomix IEX层析介质耐1.0 M NaOH CIP性能
填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
B: A+1.0 M NaCl
梯度:0-75%B in 10min
流速: 0.4 mL/min (144 cm/h)
样品: 1mg/mL溶菌酶(Lysozyme)
在线清洗: 1.0 M NaOH
可忽略的非特异性吸附
Monomix IEX表面含有多个亲水结构域,当用来进行生物分析时,能使其非特异性吸附最小化。如图7和图8所示,无论是Monomix HC30-Q还是SP都对样品(溶菌酶和牛血清蛋白)显示出最小的非特异性吸附。
图7. 在Monomix HC30-SP层析柱连续进样牛血清蛋白(BSA)样品18次
填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: 20 mM磷酸盐缓冲液+0.3 M NaCl,pH 7.0
流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)
样品: 1mg/mL牛血清蛋白(BSA)
进样量: 5 μL
图8. 在Monomix HC30-Q层析柱连续进样溶菌酶(Lysozyme)样品18次
填料:Monomix HC30-Q (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: 20 mM磷酸盐缓冲液+0.3 M NaCl,pH 7.0
流速: 0.5 mL/min (180 cm/h)
样品: 0.5mg/mL溶菌酶(Lysozyme)
进样量: 5 μL
高批间重现性
Monomix IEX通过严格控制的程序进行生产,因此具有较高的批间重现性。
图9.Monomix HC30-SP的批间重现性测试
填料:Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
B: A+1.0 M NaCl
流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)
梯度: 0-75%B in 25min
样品: 1)核糖核酸酶A 2)细胞色素C 3)溶菌酶(1mg/mL)
进样量:20 μL
图10. Monomix HC30-Q的批间重现性测试
填料:Monomix HC30-Q (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 4.6 mm ID × 50 mm (不锈钢)
流动相: A: 50 mM Tris缓冲液(pH 8.5)
B: A+0.5 M NaCl
流速: 1.0 mL/min (360 cm/h)
梯度: 0-75%B in 25min
样品: 1)卵清蛋白 2)胰蛋白酶抑制剂(1mg/mL)
进样量:20 μL
易于放大生产
Monomix IEX层析介质具有易于放大生产的特性。如图11所示,在50x220 mm的柱上实现了三种蛋白质混合物的放大分离,同时具备高分离度和高效率(未显示分析柱的色谱图)。
图11. 从小规格分析柱到较大规格制备柱的放大生产
填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 50 mm ID × 220 mm FPLC
流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH 6.0)
B: A+1.0 M NaCl
梯度: 20%-100%B in 90mi
流速: 20mL/min (61 cm/h)
进样量: 4 mL
样品: 1)核糖核酸酶A(5mg) 2)细胞色素C(5mg) 3)溶菌酶(10mg)
单克隆抗体纯化应用
1) Monomix HC15-SP
图12a. Monomix HC15-SP填料分离纯化单抗样品
填料: Monomix HC15-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 25 mm ID × 250 mm FPLC
流动相: A: 10 mM 磷酸盐缓冲液(pH8.0)
B: A+100 mM NaCl (pH8.0)
流速: 12.0 mL/min 检测器: UV 280 nm
样品: 某单抗(2.4mg/mL)进样量: 0.2 mg mAb/mL resin
图12b. Monomix HC15-SP填料分离纯化单抗样品的效果
分析柱: Antibodix WCX-NP5 (5 µm, 4.6 x 250 mm)
流动相: A: 20 mM 磷酸盐缓冲液 + 50 mM NaCl, pH 6.5
B: 20 mM 磷酸盐缓冲液 + 90 mM NaCl, pH 6.5
流速: 0.8 mL/min 检测器: UV 280 nm
样品: 浓缩后的样品 进样量: 100 µL
2) Monomix MC30-SP
图13a. Monomix MC30-SP填料分离纯化单抗样品
填料: Monomix MC30-SP (30μm, 500Å)
柱尺寸: 6.6 mm ID × 30 mm FPLC
流动相: A: 50 mM醋酸钠缓冲液(pH5.3)
B: A+1.0 M NaCl (pH5.3)
流速: 1 mL/min 进样量: 3 mL
样品: 某单抗收集液(11.55mg/mL)
图13b. Monomix MC30-SP填料分离纯化单抗样品的效果
分析柱: Zenix SEC-300 (3 μm,300 Å, 4.6×300 mm)
流动相: 150 mM 磷酸盐 (pH 7.0)
流速: 0.35mL/min 检测器: UV 280 nm
样品: 洗脱液 进样量: 2 μL
3) Monomix HC30-SP
图14a. Monomix HC30-SP填料分离纯化单抗样品
填料: Monomix HC30-SP (30μm, 1000Å)
柱尺寸: 6.6 mm ID×30 mm FPLC
流动相: A: 50 mM醋酸钠缓冲液(pH5.3)
B: A+1.0 M NaCl (pH5.3)
流速: 1 mL/min 进样量: 3 mL
样品: 某单抗收集液(11.55mg/mL)
图14b. Monomix HC30-SP填料分离纯化单抗样品的效果
分析柱: Zenix SEC-300 (3 μm,300 Å, 4.6×300 mm)
流动相: 150 mM 磷酸盐 (pH 7.0)
流速: 0.35mL/min 检测器: UV 280 nm
样品: 洗脱液 进样量: 2 μL
4) Monomix MC30-DEAE
图15a. Monomix MC30-DEAE填料分离纯化单抗样品
填料: Monomix MC30-DEAE (30μm, 500Å)
柱尺寸: 6.6 mm ID×150 mm FPLC
流动相: A: 20 mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)
B: A+0.5 M NaCl (pH7.0)
流速: 1.0 mL/min 进样量: 3 mL
样品: 某抗体样品(50.9mg/mL)
图15b. 图15a所示纯化中收集组分的SDS-PAGE分析
其中粗品进样量:30mg抗体/mL resin,SDS-PAGE进样量:粗品 25μg
产品系列
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产品名称
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官能团种类
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粒径/孔径
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订货号
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Monomix HC15
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Monomix HC15-Q
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强阴离子交换
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15μm,1000 Å
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280815950
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Monomix HC15-DEAE
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弱阴离子交换
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280915950
|
Monomix HC15-SP
|
强阳离子交换
|
280615950
|
Monomix MC15
|
Monomix MC15-Q
|
强阴离子交换
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15μm,500 Å
|
280415500
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Monomix MC15-DEAE
|
弱阴离子交换
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280515500
|
Monomix MC15-SP
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强阳离子交换
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280215500
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Monomix HC30
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Monomix HC30-Q
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强阴离子交换
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30μm,1000 Å
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280830950
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Monomix HC30-DEAE
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弱阴离子交换
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280930950
|
Monomix HC30-SP
|
强阳离子交换
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280630950
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Monomix MC30
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Monomix MC30-Q
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强阴离子交换
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30μm,500 Å
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280430500
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Monomix MC30-DEAE
|
弱阴离子交换
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280530500
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Monomix MC30-SP
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强阳离子交换
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280230500
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Monomix HC60
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Monomix HC60-Q
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强阴离子交换
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60μm,1000 Å
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280860950
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Monomix HC60-DEAE
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弱阴离子交换
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280960950
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Monomix HC60-SP
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强阳离子交换
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280660950
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Monomix MC60
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Monomix MC60-Q
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强阴离子交换
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60μm,500 Å
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280430500
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Monomix MC60-DEAE
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弱阴离子交换
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280530500
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Monomix MC60-SP
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强阳离子交换
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280230500
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包装规格为0.5, 1, 5, 10, 100L,预装柱规格为1,5mL,也可根据客户的需要提供其它规格的产品和预装柱。